Функциональная активность клеток крови одна из важных составляющих оценки иммунного статуса человека. Количественная оценка потенциальной активности специфического и неспецифического иммунного ответа может дать значимую для медицинских приложений информацию.
Для понимания того, насколько может быть активирован специфический клеточный иммунитет, у данного человека используется реакция бласттрансформации лимфоцитов. Под воздействием неспецифического стимулятора пролиферации Т лимфоцитов - фитогемагглютинина покоящиеся в норме лимфоциты побуждаются к делению. Способность Т клеток к делению, являющаяся признаком их полноценной функциональной активности, может быть строго количественно измерена с помощью техники проточной цитометрии. Изучение факторов, влияющих на способность Т лимфоцитов к пролиферации, может дать новую значимую информацию о работе иммунокомпетентных клеток. В частности, в этом проекте будет изучено, обнаруженное нами, явление ингибирующего действия продуктов распада злокачественных опухолей на функциональную активность Т клеточного иммунного ответа.
Неспецифическая иммунная реакция, обеспечивающая воспалительный ответ на различные повреждающие и инфекционные воздействия, связана, прежде всего, с функционированием нейтрофилов. Измерить потенциальную воспалительную активность можно, регистрируя их способность к взрывной выработке активных форм кислорода. Эта реакция, характерная для этих полиморфноядерных клеток, называется респираторным, или окислительным взрывом. Возможности быстрого количественного анализа распределений популяций нейтрофилов по способности к реакции респираторного взрыва могут быть реализованы с помощью техники проточной цитометрии. Было предложено несколько методик для такого рода измерений с использованием различных флуоресцентных красителей, характер флуоресценции которых зависит от окисления активными формами кислорода, образующимися в ходе реакции. Трудность, однако, заключается в том, что в большинстве этих экспериментальных систем, процесс окисления красителя подвержен влиянию многих привходящих обстоятельств, в результате чего не удается добиться крайне важной для любых медицинских исследований ситуации, когда реакция нормального здорового человека определенно отличается от ситуации возникающей при патологии. Межиндивидуальные отличия в факторах, влияющих на течение реакции, могут оказаться сравнимыми с влиянием имеющихся воспалительных процессов. Это крайне затрудняет использование таких экспериментальных подходов. Нами был предложен вариант методики с использованием легко окисляемого флуоресцентного красителя – гидроэтидина, который лишен данного принципиального недостатка и позволяет определенно судить об изменениях в организме, затрагивающих функцию полиморфноядерных лейкоцитов крови.
Был проведен ряд исследований с использованием нашего метода оценки и показано, что для нормальных доноров различного возраста и пола реакция окислительного взрыва однотипна. В то же время при различных патологиях по изменению способности нейтрофилов к реакции мы можем оценить интенсивность воспалительных процессов и их системность.
Принципиально иная картина наблюдается при таком нормальном физиологическом процессе, как беременность. Мы видим, что способность нейтрофилов у женщин с нормальным течением беременности к реакции респираторного взрыва, как правило, значительно снижена по сравнению с небеременными донорами, что вероятно связанно с регулируемым подавлением иммунологических реакций во избежание иммунологических конфликтов во взаимоотношениях матери и плода. Механизм этой реакции не вполне ясен. Мы обнаружили, что плазма крови беременных содержит белковые факторы, подавляющие способность нейтрофилов к реакции респираторного взрыва. Было проведено предварительное фракционирование плазмы крови и выявлена фракция, отвечающая за это снижение. Предполагается использование хроматографических и электрофоретических методов для дальнейшего фракционирования компонентов плазмы и идентификация искомых белков с помощью иммуноблота и двумерного электрофореза в сочетании с масс-спектрометрией.